手术室的工作服同普通的护士工作服有不一样的。正式上台是长袖长袍小高领型的衣服，开口在背后，由护士协助穿的，这个叫手术衣。颜色多为浅蓝或者浅绿。手术衣内部接触医生身体的视为洁净区，外部接触血液体液和病患的，视为污染区。手术衣必须完全隔离污染环境和洁净环境，所以裹得很严实的。
通常V领短袖短式的，正式名称叫做洗手衣。是手术室工作人员在手术室这个洁净环境中使用的工作服，不管是医生还是护士或者麻醉师都可以穿。一旦进入手术室，必须要求更换这个工作服。设计成短袖的目的在于方便参与手术的人员进行清洁手、前臂和上臂前三分之一。
手术人员洗手完成后，由护士协助套上手术衣。
有些喜欢用颜色来区分不同工作人员，例如在日本，麻醉师通常会穿暗红色的洗手衣。国内则是满眼绿色。
手术室还有一种衣服，叫参观衣，用于外部人员进入手术室参观时穿戴。